1. Tujuan: Prosedur ini bertujuan untuk menyediakan prosedur piawai untuk operasi aseptik dan perlindungan bilik steril.
2. Skop aplikasi: makmal ujian biologi
3. Orang Bertanggungjawab: Penguji Penyelia QC
4.Definisi: Tiada
5. Langkah keselamatan
Lakukan operasi aseptik dengan ketat untuk mengelakkan pencemaran mikrob;pengendali hendaklah mematikan lampu UV sebelum memasuki bilik steril.
6. Prosedur
6.1.Bilik steril hendaklah dilengkapi dengan bilik operasi steril dan bilik penampan.Kebersihan bilik operasi steril hendaklah mencapai kelas 10000. Suhu dalaman hendaklah dikekalkan pada 20-24°C dan kelembapan hendaklah dikekalkan pada 45-60%.Kebersihan bangku bersih hendaklah mencapai kelas 100.
6.2.Bilik steril hendaklah sentiasa bersih, dan dilarang sama sekali untuk menimbun serpihan untuk mengelakkan pencemaran.
6.3.Elakkan dengan ketat pencemaran semua peralatan pensterilan dan media kultur.Mereka yang tercemar harus berhenti menggunakannya.
6.4.Bilik steril hendaklah dilengkapi dengan pembasmi kuman kepekatan kerja, seperti larutan kresol 5%, alkohol 70%, larutan klormetionin 0.1%, dsb.
6.5.Bilik steril hendaklah sentiasa disterilkan dan dibersihkan dengan disinfektan yang sesuai untuk memastikan kebersihan bilik steril memenuhi keperluan.
6.6.Semua instrumen, instrumen, pinggan mangkuk dan barang lain yang perlu dibawa ke dalam bilik steril hendaklah dibalut dengan ketat dan disterilkan dengan kaedah yang sesuai.
6.7.Sebelum memasuki bilik steril, kakitangan mesti membasuh tangan mereka dengan sabun atau pembasmi kuman, dan kemudian menukar pakaian kerja khas, kasut, topi, topeng dan sarung tangan di bilik penampan (atau mengelap tangan mereka semula dengan 70% etanol) sebelum memasuki bilik steril.Lakukan operasi dalam ruang bakteria.
6.8.Sebelum menggunakan bilik steril, lampu ultraviolet di dalam bilik steril mesti dihidupkan untuk penyinaran dan pensterilan selama lebih daripada 30 minit, dan bangku bersih mesti dihidupkan untuk meniup udara pada masa yang sama.Selepas operasi selesai, bilik steril hendaklah dibersihkan tepat pada masanya dan kemudian disterilkan dengan cahaya ultraviolet selama 20 minit.
6.9.Sebelum pemeriksaan, pembungkusan luar sampel ujian hendaklah disimpan utuh dan tidak boleh dibuka untuk mengelakkan pencemaran.Sebelum pemeriksaan, gunakan bebola kapas alkohol 70% untuk membasmi kuman permukaan luar.
6.10.Semasa setiap operasi, kawalan negatif perlu dilakukan untuk memeriksa kebolehpercayaan operasi aseptik.
6.11.Apabila menyerap cecair bakteria, anda mesti menggunakan bola sedutan untuk menyerapnya.Jangan sentuh straw terus dengan mulut anda.
6.12.Jarum inokulasi mesti disterilkan dengan nyalaan sebelum dan selepas setiap penggunaan.Selepas penyejukan, kultur boleh disuntik.
6.13.Penyedut minuman, tabung uji, piring petri dan peralatan lain yang mengandungi cecair bakteria hendaklah direndam dalam baldi pensterilan yang mengandungi larutan Lysol 5% untuk pembasmian kuman, dan dibawa keluar dan dibilas selepas 24 jam.
6.14.Jika terdapat cecair bakteria yang tertumpah di atas meja atau lantai, anda harus segera menuangkan 5% larutan asid karbol atau 3% Lysol pada kawasan yang tercemar selama sekurang-kurangnya 30 minit sebelum merawatnya.Apabila pakaian kerja dan topi tercemar dengan cecair bakteria, ia hendaklah ditanggalkan serta-merta dan dibasuh selepas pensterilan wap tekanan tinggi.
6.15.Semua barang yang mengandungi bakteria hidup mesti dibasmi kuman sebelum dibilas di bawah paip.Ia dilarang sama sekali untuk mencemarkan pembetung.
6.16.Bilangan koloni di dalam bilik steril hendaklah diperiksa setiap bulan.Dengan bangku bersih terbuka, ambil beberapa piring petri steril dengan diameter dalam 90 mm, dan suntikan secara aseptik kira-kira 15 ml medium kultur agar nutrien yang telah dicairkan dan disejukkan kepada kira-kira 45°C.Selepas pemejalan, letakkannya terbalik pada 30 hingga 35 Inkubasi selama 48 jam dalam inkubator ℃.Selepas membuktikan kemandulan, ambil 3 hingga 5 pinggan dan letakkan di kiri, tengah dan kanan kedudukan kerja.Selepas membuka penutup dan mendedahkannya selama 30 minit, letakkannya terbalik dalam inkubator 30 hingga 35°C selama 48 jam dan bawa keluar.meneliti.Purata bilangan pelbagai bakteria pada plat dalam kawasan bersih kelas 100 tidak boleh melebihi 1 koloni, dan bilangan purata dalam bilik bersih kelas 10000 tidak boleh melebihi 3 koloni.Jika melebihi had, bilik steril hendaklah dibasmi kuman secara menyeluruh sehingga pemeriksaan berulang memenuhi keperluan.
7. Rujuk bab (Kaedah Pemeriksaan Kemandulan) dalam "Kaedah Pemeriksaan Kebersihan Dadah" dan "Amalan Operasi Standard China untuk Pemeriksaan Dadah".
8. Jabatan Agihan: Jabatan Pengurusan Kualiti
Panduan teknikal bilik bersih:
Selepas mendapat persekitaran steril dan bahan steril, kita mesti mengekalkan keadaan steril untuk mengkaji mikroorganisma tertentu yang diketahui atau menggunakan fungsinya.Jika tidak, pelbagai mikroorganisma dari luar boleh bercampur dengan mudah. Fenomena pencampuran mikroorganisma yang tidak relevan dari luar dipanggil bakteria pencemar dalam mikrobiologi.Mencegah pencemaran adalah teknik kritikal dalam kerja mikrobiologi.Pensterilan lengkap di satu pihak dan pencegahan pencemaran di pihak yang lain adalah dua aspek teknik aseptik.Di samping itu, kita mesti menghalang mikroorganisma yang dikaji, terutamanya mikroorganisma patogenik atau mikroorganisma kejuruteraan genetik yang tidak wujud dalam alam semula jadi, daripada melarikan diri daripada bekas eksperimen kita ke persekitaran luaran.Untuk tujuan ini, dalam mikrobiologi, terdapat banyak langkah.
Bilik steril biasanya merupakan bilik kecil yang disediakan khas di makmal mikrobiologi.Boleh dibina dengan kepingan dan kaca.Kawasan itu tidak boleh terlalu besar, kira-kira 4-5 meter persegi, dan ketinggiannya hendaklah kira-kira 2.5 meter.Bilik penampan hendaklah disediakan di luar bilik steril.Pintu bilik penampan dan pintu bilik steril tidak boleh menghadap arah yang sama untuk mengelakkan aliran udara daripada membawa masuk pelbagai bakteria.Kedua-dua bilik steril dan bilik penampan mestilah kedap udara.Peralatan pengudaraan dalaman mesti mempunyai peranti penapisan udara.Lantai dan dinding bilik steril mestilah licin, sukar untuk menampung kotoran dan mudah dibersihkan.Permukaan kerja hendaklah rata.Kedua-dua bilik steril dan bilik penampan dilengkapi dengan lampu ultraviolet.Lampu ultraungu dalam bilik steril adalah 1 meter dari permukaan kerja.Kakitangan yang memasuki bilik steril hendaklah memakai pakaian dan topi yang disterilkan.
Pada masa ini, bilik steril kebanyakannya wujud di kilang mikrobiologi, manakala makmal am menggunakan bangku bersih.Fungsi utama bangku bersih adalah menggunakan peranti aliran udara lamina untuk mengeluarkan pelbagai habuk kecil termasuk mikroorganisma pada permukaan kerja.Peranti elektrik membenarkan udara melalui penapis hepa dan kemudian memasuki permukaan kerja, supaya permukaan kerja sentiasa disimpan di bawah kawalan udara steril yang mengalir.Selain itu, terdapat tirai udara berkelajuan tinggi di bahagian tepi yang dekat dengan luar untuk menghalang udara bakteria luar daripada masuk.
Di tempat yang mempunyai keadaan yang sukar, kotak steril kayu juga boleh digunakan sebagai ganti bangku bersih.Kotak steril mempunyai struktur yang ringkas dan mudah dialihkan.Terdapat dua lubang di hadapan kotak, yang disekat oleh pintu tolak-tarik apabila tidak beroperasi.Anda boleh memanjangkan tangan anda semasa operasi.Bahagian atas hadapan dilengkapi dengan kaca untuk memudahkan operasi dalaman.Terdapat lampu ultraviolet di dalam kotak, dan peralatan dan bakteria boleh dimasukkan melalui pintu kecil di sisi.
Teknik operasi aseptik pada masa ini bukan sahaja memainkan peranan penting dalam penyelidikan dan aplikasi mikrobiologi, tetapi juga digunakan secara meluas dalam banyak bioteknologi.Contohnya, teknologi transgenik, teknologi antibodi monoklonal, dsb.
Masa siaran: Mac-06-2024