1. Tujuan: Prosedur ini bertujuan untuk menyediakan prosedur piawai untuk operasi aseptik dan perlindungan bilik steril.
2. Skop aplikasi: makmal ujian biologi
3. Orang yang Bertanggungjawab: Penguji Penyelia QC
4. Definisi: Tiada
5. Langkah berjaga-jaga keselamatan
Lakukan operasi aseptik dengan ketat untuk mencegah pencemaran mikrob; pengendali harus mematikan lampu UV sebelum memasuki bilik steril.
6. Prosedur
6.1. Bilik steril hendaklah dilengkapi dengan bilik bedah steril dan bilik penampan. Kebersihan bilik bedah steril hendaklah mencapai kelas 10000. Suhu dalaman hendaklah dikekalkan pada 20-24°C dan kelembapan hendaklah dikekalkan pada 45-60%. Kebersihan bangku yang bersih hendaklah mencapai kelas 100.
6.2. Bilik steril hendaklah sentiasa bersih, dan dilarang sama sekali untuk menimbun serpihan bagi mengelakkan pencemaran.
6.3. Cegah sepenuhnya pencemaran semua peralatan pensterilan dan media kultur. Peralatan yang tercemar harus berhenti menggunakannya.
6.4. Bilik steril hendaklah dilengkapi dengan disinfektan kepekatan kerja, seperti larutan kresol 5%, alkohol 70%, larutan klormetionina 0.1%, dan sebagainya.
6.5. Bilik steril hendaklah disterilkan secara berkala dan dibersihkan dengan disinfektan yang sesuai bagi memastikan kebersihan bilik steril memenuhi keperluan.
6.6. Semua peralatan, instrumen, pinggan mangkuk dan barang-barang lain yang perlu dibawa ke dalam bilik steril hendaklah dibalut rapat dan disterilkan dengan kaedah yang sesuai.
6.7. Sebelum memasuki bilik steril, kakitangan mesti mencuci tangan mereka dengan sabun atau disinfektan, dan kemudian menukar kepada pakaian kerja khas, kasut, topi, topeng muka dan sarung tangan di bilik penampan (atau mengelap tangan mereka sekali lagi dengan etanol 70%) sebelum memasuki bilik steril. Lakukan operasi di dalam kebuk bakteria.
6.8. Sebelum menggunakan bilik steril, lampu ultraungu di dalam bilik steril mesti dihidupkan untuk penyinaran dan pensterilan selama lebih daripada 30 minit, dan bangku yang bersih mesti dihidupkan untuk tiupan udara pada masa yang sama. Selepas operasi selesai, bilik steril hendaklah dibersihkan tepat pada masanya dan kemudian disterilkan dengan cahaya ultraungu selama 20 minit.
6.9. Sebelum pemeriksaan, pembungkusan luar sampel ujian hendaklah disimpan utuh dan tidak boleh dibuka untuk mengelakkan pencemaran. Sebelum pemeriksaan, gunakan bebola kapas alkohol 70% untuk membasmi kuman permukaan luar.
6.10. Semasa setiap operasi, kawalan negatif perlu dilakukan untuk memeriksa kebolehpercayaan operasi aseptik.
6.11. Semasa menyerap cecair bakteria, anda mesti menggunakan bola sedutan untuk menyerapnya. Jangan sentuh straw secara langsung dengan mulut anda.
6.12. Jarum inokulasi mesti disterilkan dengan api sebelum dan selepas setiap penggunaan. Selepas disejukkan, kultur boleh diinokulasi.
6.13. Straw, tabung uji, piring petri dan peralatan lain yang mengandungi cecair bakteria hendaklah direndam dalam baldi pensterilan yang mengandungi larutan Lysol 5% untuk pembasmian kuman, dan dikeluarkan serta dibilas selepas 24 jam.
6.14. Jika terdapat cecair bakteria yang tertumpah di atas meja atau lantai, anda perlu segera menuangkan larutan asid karbol 5% atau 3% Lysol pada kawasan yang tercemar selama sekurang-kurangnya 30 minit sebelum merawatnya. Apabila pakaian dan topi kerja tercemar dengan cecair bakteria, ia perlu ditanggalkan serta-merta dan dibasuh selepas pensterilan wap tekanan tinggi.
6.15. Semua barang yang mengandungi bakteria hidup mesti dibasmi kuman sebelum dibilas di bawah paip. Adalah dilarang sama sekali untuk mencemarkan pembetung.
6.16. Bilangan koloni dalam bilik steril perlu diperiksa setiap bulan. Dengan bangku bersih terbuka, ambil beberapa piring petri steril dengan diameter dalam 90 mm, dan suntikan secara aseptik kira-kira 15 ml medium kultur agar nutrien yang telah dicairkan dan disejukkan kepada kira-kira 45°C. Selepas pemejalan, letakkannya secara terbalik pada suhu 30 hingga 35°C. Inkubasi selama 48 jam dalam inkubator ℃. Selepas membuktikan kesterilan, ambil 3 hingga 5 plat dan letakkannya di kiri, tengah dan kanan kedudukan kerja. Selepas membuka penutup dan mendedahkannya selama 30 minit, letakkannya secara terbalik dalam inkubator 30 hingga 35°C selama 48 jam dan keluarkannya. Periksa. Purata bilangan bakteria pelbagai pada plat dalam kawasan bersih kelas 100 tidak boleh melebihi 1 koloni, dan purata bilangan dalam bilik bersih kelas 10000 tidak boleh melebihi 3 koloni. Jika had dilampaui, bilik steril hendaklah dibasmi kuman sepenuhnya sehingga pemeriksaan berulang memenuhi keperluan.
7. Rujuk bab (Kaedah Pemeriksaan Steril) dalam "Kaedah Pemeriksaan Kebersihan Dadah" dan "Amalan Operasi Piawai China untuk Pemeriksaan Dadah".
8. Jabatan Pengedaran: Jabatan Pengurusan Kualiti
Panduan teknikal bilik bersih:
Selepas mendapatkan persekitaran steril dan bahan steril, kita mesti mengekalkan keadaan steril untuk mengkaji mikroorganisma tertentu yang diketahui atau menggunakan fungsinya. Jika tidak, pelbagai mikroorganisma dari luar boleh bercampur dengan mudah. Fenomena pencampuran mikroorganisma yang tidak relevan dari luar dipanggil bakteria pencemar dalam mikrobiologi. Mencegah pencemaran adalah teknik kritikal dalam kerja mikrobiologi. Pensterilan lengkap di satu pihak dan pencegahan pencemaran di pihak yang lain adalah dua aspek teknik aseptik. Di samping itu, kita mesti menghalang mikroorganisma yang dikaji, terutamanya mikroorganisma patogen atau mikroorganisma yang direkayasa secara genetik yang tidak wujud dalam alam semula jadi, daripada terlepas dari bekas eksperimen kita ke persekitaran luaran. Untuk tujuan ini, dalam mikrobiologi, terdapat banyak langkah.
Bilik steril biasanya merupakan bilik kecil yang disediakan khas di makmal mikrobiologi. Boleh dibina dengan kepingan dan kaca. Kawasannya tidak boleh terlalu besar, kira-kira 4-5 meter persegi, dan ketinggiannya kira-kira 2.5 meter. Bilik penimbal perlu disediakan di luar bilik steril. Pintu bilik penimbal dan pintu bilik steril tidak boleh menghadap arah yang sama untuk mengelakkan aliran udara daripada membawa masuk pelbagai bakteria. Kedua-dua bilik steril dan bilik penimbal mesti kedap udara. Peralatan pengudaraan dalaman mesti mempunyai peranti penapisan udara. Lantai dan dinding bilik steril mesti licin, sukar untuk menyimpan kotoran dan mudah dibersihkan. Permukaan kerja hendaklah rata. Kedua-dua bilik steril dan bilik penimbal dilengkapi dengan lampu ultraungu. Lampu ultraungu di bilik steril berada 1 meter dari permukaan kerja. Kakitangan yang memasuki bilik steril hendaklah memakai pakaian dan topi yang telah disterilkan.
Pada masa ini, bilik steril kebanyakannya terdapat di kilang mikrobiologi, manakala makmal am menggunakan bangku bersih. Fungsi utama bangku bersih adalah untuk menggunakan peranti aliran udara laminar bagi menyingkirkan pelbagai habuk kecil termasuk mikroorganisma pada permukaan kerja. Peranti elektrik ini membolehkan udara melalui penapis HEPA dan kemudian memasuki permukaan kerja, supaya permukaan kerja sentiasa dikawal oleh udara steril yang mengalir. Selain itu, terdapat tirai udara berkelajuan tinggi di bahagian tepi yang berdekatan dengan luar untuk menghalang udara bakteria luaran daripada masuk.
Di tempat-tempat yang mempunyai keadaan yang sukar, kotak steril kayu juga boleh digunakan sebagai ganti bangku bersih. Kotak steril ini mempunyai struktur yang ringkas dan mudah dialihkan. Terdapat dua lubang di bahagian hadapan kotak, yang disekat oleh pintu tolak-tarik apabila tidak beroperasi. Anda boleh menghulurkan tangan anda semasa operasi. Bahagian atas bahagian hadapan dilengkapi dengan kaca untuk memudahkan operasi dalaman. Terdapat lampu ultraungu di dalam kotak, dan peralatan serta bakteria boleh dimasukkan melalui pintu kecil di sisi.
Teknik operasi aseptik pada masa ini bukan sahaja memainkan peranan penting dalam penyelidikan dan aplikasi mikrobiologi, tetapi juga digunakan secara meluas dalam banyak bioteknologi. Contohnya, teknologi transgenik, teknologi antibodi monoklonal, dan sebagainya.
Masa siaran: 6 Mac-2024